亚洲?v成人一区国产精品麻豆-午夜少妇久久精品-日韩国产精品天天更新-日本精品久久久-免费一级特黄日韩大片-精品精品国产?v毛片久久久久-免费日本韩无砖码高清区-无码一区二区三区?V-免费无码aV动漫在线看-一区二区三区国产高清在线播放

【中文名稱(chēng)】：偽狂犬病毒gE2.0抗體診斷試劑盒

【產(chǎn)品規(guī)格】：96T/48T。

【保存條件】：2-8℃低溫保存

【保質(zhì)期】：6個(gè)月，所有試劑盒均提供批次。

預(yù)期用途：定性檢測(cè)豬血清/血漿中抗偽狂犬病毒gE蛋白抗體，適用于豬場(chǎng)野毒感染篩查、疫苗免疫效果評(píng)估、偽狂犬病凈化監(jiān)測(cè)。

檢測(cè)原理：采用間接ELISA法，酶標(biāo)板預(yù)包被重組gE蛋白抗原，若樣本中存在gE抗體，會(huì)與板上抗原結(jié)合，后續(xù)通過(guò)HRP標(biāo)記二抗顯色，顏色深淺與抗體含量正相關(guān)。

樣本采集與預(yù)處理

樣本類(lèi)型：豬血清、血漿（EDTA/檸檬酸鈉抗凝）。

采集方法：全血3000~4000r/min離心10分鐘分離血清，要求血清清亮無(wú)溶血、無(wú)細(xì)菌污染，避免反復(fù)凍融。

保存條件：樣本采集后2~8℃可保存1周，-20℃可長(zhǎng)期保存，長(zhǎng)期保存需分裝避免反復(fù)凍融。

樣本稀釋?zhuān)捍龣z血清用樣本稀釋液按1:10比例預(yù)稀釋?zhuān)ㄈ?0μL稀釋液+10μL血清），充分混勻后備用。

四、操作步驟

試劑準(zhǔn)備

試劑盒提前從冷藏環(huán)境取出，室溫平衡至少30分鐘，所有試劑充分搖勻后使用。

濃縮洗滌液用蒸餾水/去離子水按1:20比例稀釋?zhuān)ㄈ?0mL濃縮液+190mL水），若低溫下有結(jié)晶析出，可37℃水浴助溶后使用。

根據(jù)實(shí)驗(yàn)所需數(shù)量取出酶標(biāo)板條，未使用的板條立即放回自封袋密封，2~8℃保存。

加樣與孵育

設(shè)置空白對(duì)照1孔（僅加100μL樣本稀釋液）、陰性對(duì)照2孔、陽(yáng)性對(duì)照2孔，其余為樣本孔。

陰、陽(yáng)性對(duì)照孔直接加入對(duì)應(yīng)對(duì)照血清100μL；樣本孔加入90μL樣本稀釋液+10μL預(yù)稀釋后血清（樣本最終稀釋比例為1:100），充分混勻。

貼好封板膜，37℃恒溫避光孵育30分鐘（推薦使用水浴箱或濕盒，避免液體蒸發(fā)）。

洗滌

揭去封板膜，甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿(mǎn)工作洗滌液，靜置30秒后甩干，重復(fù)洗滌5次，最后一次在吸水紙上拍干，確保無(wú)殘留液體。

使用自動(dòng)洗板機(jī)時(shí)，每孔注入350μL洗滌液，浸泡1分鐘后洗滌，結(jié)果更穩(wěn)定。

加酶標(biāo)二抗

除空白孔外，每孔加入100μL HRP標(biāo)記二抗，貼好封板膜，37℃恒溫避光孵育30分鐘。

重復(fù)步驟3的洗滌操作。

顯色與終止

每孔依次加入TMB底物液A、B各50μL，輕輕振蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘，此時(shí)陽(yáng)性孔會(huì)逐漸變?yōu)樗{(lán)色。

每孔加入終止液50μL，溶液由藍(lán)色變?yōu)辄S色，終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成讀數(shù)。

讀數(shù)

酶標(biāo)儀以空白孔調(diào)零，檢測(cè)450nm波長(zhǎng)處各孔OD值（推薦用630nm作為參比波長(zhǎng)，減少板底劃痕干擾）。

結(jié)果判定

實(shí)驗(yàn)有效性判斷

陽(yáng)性對(duì)照平均OD值≥0.6，陰性對(duì)照平均OD值≤0.10，實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效。

若對(duì)照結(jié)果不符合上述要求，需重新進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。